<table id="eegii"></table>
  • <table id="eegii"></table>
  • <td id="eegii"><option id="eegii"></option></td>
    <td id="eegii"><option id="eegii"></option></td>
  • 歡迎進入蘇州阿爾法生物實驗器材有限公司!
    技術文章
    首頁 > 技術文章 > 流式細胞儀熒光結果分析中的常見問題及解決方法

    流式細胞儀熒光結果分析中的常見問題及解決方法

     更新時間:2023-07-07 點擊量:1360

       流式細胞儀是一種用于細胞分析的實驗室儀器,它能夠對單個細胞進行快速而精確的定量和質量分析。它主要通過將細胞懸浮液注入到儀器中,利用激光器照射細胞并檢測經過細胞的光線散射和熒光信號,從而獲取大量有關細胞形態、大小、復雜度、表面標記以及內部分子的信息。它可同時測量多個參數,并具備高通量性能,能夠快速分析數以萬計的細胞,并提供詳細的統計學數據。它廣泛應用于免疫學、細胞生物學、藥理學、腫瘤學等領域的研究和實驗中。

        然而,在分析流式細胞儀得到的熒光結果時,常常會遇到一些問題,如信號強度弱、背景高、細胞群分布異常等。本文將介紹常見問題,并提供相應的解決方法。

    一、信號強度弱

    1. 信號補償不正確:檢查流式細胞儀上的單色陽性對照是否設置正確,并確保門控和補償設置正確。

    2. 用于檢測的抗體不足:增加抗體的量或濃度。

    二、熒光強度高

    1. 抗體濃度過高:減少每個樣本中添加的抗體量。

    2. 過量抗體被捕獲:洗滌步驟要充分,并在洗滌緩沖液中加入吐溫或Triton,以保持細胞的透化作用。

    3. 封閉不足:在抗體混合液中加入1%-3%的封閉劑,并增加封閉步驟。

    三、背景高/陽性細胞百分比高

    1. 增益設置過高/補償過低:使用陽性對照正確設置流式細胞儀,并使用補償減少小顆粒背景信號和降低增益。

    2. 抗體過量:降低抗體的濃度,并在洗滌緩沖液中加入去污劑,確保洗去過量的抗體。

    四、在應該只有一個細胞群的情況下觀察到兩個或多個細胞群

    1. 表達靶蛋白的細胞群不止一個:檢查樣本中包含的細胞類型預期的蛋白表達水平,并確保細胞充分分離。

    2. 出現細胞雙峰:細胞雙峰顯示為第二大細胞群,其熒光強度大約是單細胞熒光強度的兩倍。在染色前用移液槍將細胞輕柔混勻,并在細胞儀中運行之前再次混勻。

    五、側向散射背景偏高(來自小顆粒)

    1. 細胞裂解:確保樣本中的細胞沒有裂解和破碎,樣本應新鮮并正確制備,避免高速離心或激烈渦旋的操作。

    2. 細菌污染:確保樣本不受細菌污染,細菌會自動發出較弱的熒光,導致高事件率。

    六、低事件率

    1. 每毫升的細胞數過少:將細胞稀釋至1×105至1×106個細胞/mL,確保細胞均勻混合。

    2. 細胞聚集阻塞管道:在染色前輕柔吹打幾次,確保得到同源單細胞懸液,也可以篩選或過濾細胞,去除團塊。

    七、高事件率

    1. 細胞數量過多:稀釋樣本至1×105至1×106個細胞/mL。

       通過以上問題及解決方法,我們可以更好地分析流式細胞儀得到的熒光結果。然而,需要注意的是,不同實驗條件可能會導致不同的問題和解決方法。因此,根據實際情況,選擇合適的解決方案是很重要的。同時,定期檢查和維護流式細胞儀,以確保其正常運行,也是避免問題發生的重要措施。     

        蘇州阿爾法生物提供的進口 GuavaregMuereg細胞分析儀, ImageStream®X MkII成像 流式細胞分析儀是將流式 細胞儀的高檢測速度、高靈敏度以及表型分析能力與顯微鏡的高分辨圖像及功能性研究結合。ImageStreamX MkII系統屬于臺式多色成像 流式 細胞儀,可采集多達12個通道的細胞圖像。

    亚洲精品小仙女在线观看_亚洲中文字幕久久无码精品_亚洲中文无码成人影院_国产好大对白露脸高潮
    <table id="eegii"></table>
  • <table id="eegii"></table>
  • <td id="eegii"><option id="eegii"></option></td>
    <td id="eegii"><option id="eegii"></option></td>