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                瓊脂糖凝膠過濾基質樹脂填料

                描述:瓊脂糖凝膠過濾基質樹脂填料 Smartaroe 蛋白純化試劑是一種球形瓊脂糖凝膠過濾基質,Smartarose 4B和Smartarose 6B的瓊脂糖含量分別為4%和6%o Smartarose CL凝膠是 Smartarose 4B和Smartarose 6B的衍生物,化學和物理性能更優異,流速更快。Smartarose CL凝膠耐有機溶劑,因此適合在有機溶劑 中分離物質。

                更新時間:2024-02-04
                產品型號:Smartaroe 蛋白純化
                廠商性質:經銷商
                詳情介紹

                瓊脂糖凝膠過濾基質樹脂填料 Smartaroe 蛋白純化

                Smartarose是一種球形瓊脂糖凝膠過濾基質,Smartarose 4B和Smartarose 6B的瓊脂糖含量分別為4%和6%o Smartarose CL凝膠是 Smartarose 4B和Smartarose 6B的衍生物,化學和物理性能更優異,流速更快。Smartarose CL凝膠耐有機溶劑,因此適合在有機溶劑 中分離物質。Smartarose和Smartarose CL分離范圍較廣,適合對分子量不同的樣品進行表征或分離。


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                瓊脂糖凝膠過濾基質樹脂填料 Smartaroe 蛋白純化性能

                項目

                性能

                Smartarose 瓊脂糖 最佳分離范圍 粒徑 推薦線性流速(cm/h) pH穩定性**

                4B 6B CL-4B CL-6B

                4% 6% 4% 6%

                70x103-20x106 1Qx103 -4x106 70x103-20x106 10x10 3-4x106

                45-165 pm

                11 cm/h 14 cm/h 26 cm/h 30 cm/h

                4-9 4-9 3-13 3-13

                耐受凝膠層析常用溶液,如M尿素、M 鹽酸

                試劑耐受

                耐受凝膠層析常用溶液,如M尿素、6M鹽酸 Mo也耐受乙醇、DMF、THE、 丙酮、DMS、弧。 氯仿、二氯甲烷、二氯乙烷、卩比卩定、磷酸三乙

                酯和乙月青等有機溶劑。

                物理性能 滅菌

                pH或離子強度變化引起的體積變化可以忽略不計

                化學方法 水蒸氣高壓滅菌,120°C, 20 min

                   pH范圍是我們根據實驗和經驗估算的。請注意:pH長期穩定性是指凝膠在長時間內其層析性能不會改變的pH范圍。pH短期穩定性是指凝膠再生和清洗時穩定的pH范圍。

                裝柱說明:

                介質保存于20%乙醇。裝柱前建議將20%乙醇抽濾去除,置換成去離子水。

                將75%介質和25%去離子水混句,真空負壓脫氣。不要使用粘性試劑裝柱。裝柱完成后,可以用粘性緩沖液低流速平衡層析柱。

                2.2介質裝填

                裝柱方法有兩步,第二步應在恒壓下進行,柱壓見表2。凝膠層析的分辨率隨柱床高度的增加而增加。因此,柱床高度最好在60 cm以上。

                表2.推薦裝柱流速和壓力

                介質

                步驟1

                流速(cm/h)

                步驟2

                壓力(MPa.bar.Psi)

                Smartarose 4B

                15

                0.018,0.18,2.6

                Smartarose 6B

                30

                0.025,0.25,3.6

                Smartarose CL-4B

                30

                0.025,0.25,3.6

                Smartarose CL-6B

                30

                0.045,0.45,6.4

                層析柱的裝填(使用儲液器裝填)

                裝柱前根據層析柱直徑計算柱子底面積,根據所需裝柱高度計算所需介質體積,公式如下: V = 1.157ir2h


                V:所需介質體積ml

                1.15:壓縮系數(不同介質壓縮系數不同)

                r:柱管半徑cm

                h:裝填高度cm

                1) 用去離子水沖洗層析柱底篩板與接頭,確保柱底篩板上無氣泡,關閉柱底出口,并在柱底部留出1-2 cm的去離子水。

                2) 將填料懸浮起來,小心的將漿液連續地倒入層析柱中。用玻璃棒沿著柱壁倒入漿液可減少氣泡的產生。

                3) 如果使用儲液器,應立即在層析柱和儲液器中加滿水,將進樣分配器放置于漿液表面,連接至泵上,避免在分配器或進樣管中產生氣泡。

                4) 打開層析柱底部出口,開啟泵,使其在設定的流速下進行。最初應讓緩沖液緩慢流過層析柱,然后緩慢增加至最終流速,這樣可避免液 壓對所形成柱床的沖擊,也可以避免柱床形成的不均勻。如果達不到推薦的壓力或流速,可以用你所使用泵的最大流速,這樣也可以得到 一個很好的裝填效果。(注意:在隨后的色譜程序中,不要超過最大裝柱流速的75%)當柱床高度穩定后,在最后的裝柱流速下至少再上2 倍柱床體積的去離子水。標上柱床高度。

                5) 關閉泵,關閉層析柱出口。

                6) 如果使用儲液器,去除儲液器,將分配器置于層析柱中。

                7) 將分配器推向柱子至標記的柱床高度處。允許裝柱液進入分配器,鎖緊分配器接頭。

                8) 將裝填好的層析柱連接至泵或色譜系統中,開始平衡。如果需要可以重新調整分配器。

                2.3柱效測試

                為了檢驗層析柱的質量,應進行柱效測試,以確定理論塔板數和峰不對稱系數。

                洗脫液:去離子水

                樣品:2% (v/v)丙酮水溶液或者1 M NaCI溶液

                如圖1所示計算理論塔板數,用如下公式:N/m = 5.54 (VrM)2 x 1000/L

                計算峰不對稱系數(AS)公式如下:AS = b/a (如圖1所示)

                 瓊脂糖凝膠

                 

                3 .純化流程

                3.1緩沖液的準備

                所用水和緩沖液在使用之前建議用0.22 pm或0.45 pm濾膜過濾。

                平衡液為蛋白純化后,用于保護蛋白的溶液,根據客戶需求自行選擇。

                3.2樣品準備

                樣品在上樣前建議離心或用0.22 pm或0.45|jm濾膜過濾,減少雜質,防止堵塞柱子。

                3.3樣品純化

                1) 平衡

                上樣之前,用平衡液至少平衡兩個柱體積,或直到基線穩定。含去垢劑的溶液可能需要平衡更長時間。

                2) 上樣

                推薦上樣體積為柱體積的2-5%o可以通過上樣管或樣品環來上樣。純化流速最高不能超過裝柱流速的70%0

                3) 再生

                再生通常用水沖洗2倍柱體積,然后用緩沖液沖洗2-3倍柱體積,如果不立刻使用,則用20%乙醇平衡后,4-30°C保存。對不同的樣品, 建議大約5次循環后,采用完整的在位清洗(CIP)o

                4.清洗及保存

                4.1 CIP (Cleaning In Place)清洗

                CIP是去除以前生產過程中產生的結合過緊密、沉淀或變性的物質。在某些情況下,介質再生后,月謳或變性蛋白跡物質仍可育誡留茁掃=o 需要制鵰料中已知污染I刎樓來設H特定的CIP程序。

                當出現下列情況,需要對介質進行在位清洗:

                •柱壓增高;

                •填料顏色變化明顯;

                •分辨率降低;

                •上接頭與凝膠表面之間出現空隙;

                •如果反壓增高,在介質清洗前檢查閥門、管線等中止情況。

                1) 去除非特異性結合蛋白和脂蛋白

                用0.5 M NaOH清洗一個柱體積,去離子水或緩沖液平衡至中性,流速40 cm/ho

                2) 去除一些沉淀或變性物質,建議使用下面的方法

                用4倍柱體積的1.0-2.0 M NaOH溶液,流速40 cm/h對介質進行清洗,然后立即用2-3倍柱體積的水清洗。

                3) 去除一些強結合的疏水蛋白

                用4-10倍柱體積的70%乙醇或30%異丙醇清洗(使用有機溶劑要梯度清洗,避免起泡)或者用含去垢劑的酸或中性溶液。比如,用1 M 醋酸溶液含0.5%非離子型去垢劑,清洗流速40 cm/h。隨后用70%乙醇沖洗5個柱體積洗去殘留去垢劑。

                4.2保存

                CIP之后的介質如果不使用可以用20%乙醇,4 -30°C保存。

                5 .訂購信息及相關產品

                產品名稱

                貨號

                規格


                SEC0060

                25 ml


                SEC0061

                100 ml

                Smartarose 4B

                SEC0062

                500 ml


                SEC0063

                1 L


                SEC0064

                10 L


                SEC0070

                25 ml


                SEC0071

                100 ml

                Smartarose 6B

                SEC0072

                500 ml


                SEC0073

                1 L


                SEC0074

                10L


                SEC0080

                25 ml


                SEC0081

                100 ml

                Smartarose CL-4B

                SEC0082

                500 ml


                SEC0083

                1 L


                SEC0084

                10L


                SEC0090

                25 ml


                SEC0091

                100 ml

                Smartarose CL-6B

                SEC0092

                500 ml


                SEC0093

                1 L


                SEC0094

                10 L

                         蘇州阿爾法生物提供的瓊脂糖凝膠介質、葡聚糖凝膠介質等蛋白純化和分離填料以及相關生物試劑。另外還提供、組氨酸標簽蛋白親和純化介質、GST-tag蛋白親和純化介質、 MBP-tag蛋白親和純化介質、生物素Biotin-tag蛋白親和純化介質、Strep-tagll標簽親和純化介質、 標簽抗體親和純化介質等標簽蛋白親和層析介質; 離子交換層析 、色譜柱、離子交換層析樹脂、疏水層析介質、 磁性微球等。

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